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薄層色譜儀

薄層掃描儀是可以對斑點(diǎn)進(jìn)行掃描的專用分光光度計,用可見光或紫外光作光源,線性掃描或鋸齒掃描薄層板展開后的斑點(diǎn),該斑點(diǎn)就吸收該組分特征波長的單色光,剩余的單色光經(jīng)透射或反射或發(fā)射熒光,由檢測器積分起來,獲得這塊斑點(diǎn)面積的待測物質(zhì)含量。

  簡介

  薄層色譜又叫薄板層析,是色譜法中的一種,是快速分離和定性分析少量物質(zhì)的一種很重要的實驗技術(shù),屬固—液吸附色譜,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn),一方面適用于少量樣品(幾到幾微克,甚至0.01微克)的分離;另一方面在制作薄層板時,把吸附層加厚加大,因此,又可用來精制樣品,此法特別適用于揮發(fā)性較小或較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的質(zhì)。此外,薄層色譜法還可用來跟蹤有機(jī)反應(yīng)及進(jìn)行柱色譜之前的一種“預(yù)試”。

  薄層色譜(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又稱薄層層析,屬于固-液吸附色譜。是近年來發(fā)展起來的一種微量、快速而簡單的色譜法,它兼?zhèn)淞酥V和紙色譜的優(yōu)點(diǎn)。一方面適用于小量樣品(幾到幾十微克,甚至0.01μg)的分離;另一方面若在制作薄層板時,把吸附層加厚,將樣品點(diǎn)成一條線,則可分離多達(dá)500mg的樣品。因此又可用來精制樣品。故此法特別適用于揮發(fā)性較小或在較高溫度易發(fā)生變化而不能用氣相色譜分析的物資。此外,在進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)時,常利用薄層色譜觀察原料斑點(diǎn)的逐步消失來判斷反應(yīng)是否完成。

  薄層色譜是在被洗滌干凈的玻板(10×3cm左右)上均勻的涂一層吸附劑或支持劑,帶干燥、活化后將樣品溶液用管口平整的毛細(xì)管滴加于離薄層板一端約1cm處的起點(diǎn)線上,涼干或吹干后置薄層板于盛有展開劑的展開槽內(nèi),浸入深度為0.5cm。待展開劑前沿離頂端約1cm附近時,將色譜板取出,干燥后噴以顯色劑,或在紫外燈下顯色。

  色譜法

  薄層色譜法,是將適宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或鋁基片上,成一均勻薄層。待點(diǎn)樣、展開后,與適宜的對照物按同法所得的色譜圖作對比,用以進(jìn)行藥品的鑒別、雜質(zhì)檢查或含量測定的方法。

  儀器材料

  (1) 玻板 除另有規(guī)定外,用5cm×20cm,10cm×20cm或20cm×20cm的規(guī)格,要求光

  滑、平整,洗凈后不附水珠,晾干。

  (2) 固定相或載體 最常用的有硅膠G、硅膠GF<[254]> 、硅膠H、 硅膠HF<[254]>,

  其次有硅藻土、硅藻土G、氧化鋁、氧化鋁G、微晶纖維素、 微晶纖維素F<[254]>等。

  其顆粒大小,一般要求直徑為10~40μm。薄層涂布,一般可分無黏合劑和含黏合劑兩種;

  前者系將固定相直接涂布于玻板上, 后者系在固定相中加入一定量的黏合劑,一般常用

  10%~15%煅石膏(CaSO4.2H2O在140℃加熱4小時),混勻后加水適量使用,或用羧甲基

  纖維素鈉水溶液(0.5%~0.7%)適量調(diào)成糊狀,均勻涂布于玻板上。也有含一定固定相

  或緩沖液的薄層。

  (3) 涂布器 應(yīng)能使固定相或載體在玻板上涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。

  (4) 點(diǎn)樣器 同紙色譜法項下。

  (5) 展開室 應(yīng)使用適合薄層板大小的玻璃制薄層色譜展開缸,并有嚴(yán)密的蓋子,

  除另有規(guī)定外,底部應(yīng)平整光滑,應(yīng)便于觀察。

  操作方法

  (1) 薄層板制備 除另有規(guī)定外,將1份固定相和3份水在研缽中向一方向研磨混合,

  去除表面的氣泡后,倒入涂布器中,在玻板上平穩(wěn)地移動涂布器進(jìn)行涂布(厚度為0.2~

  0.3mm),取下涂好薄層的玻板,置水平臺上于室溫下晾干,后在110℃烘30分鐘,即置

  有干燥劑的干燥箱中備用。使用前檢查其均勻度(可通過透射光和反射光檢視)。

  (2) 點(diǎn)樣 除另有規(guī)定外,用點(diǎn)樣器點(diǎn)樣于薄層板上,一般為圓點(diǎn),點(diǎn)樣基線距底

  邊2.0cm,樣點(diǎn)直徑及點(diǎn)間距離同紙色譜法,點(diǎn)間距離可視斑點(diǎn)擴(kuò)散情況以不影響檢出為

  宜。點(diǎn)樣時必須注意勿損傷薄層表面。

  (3) 展開 展開缸如需預(yù)先用展開劑飽和,可在缸中加入足夠量的展開劑,并在壁

  上貼二條與缸一樣高、寬的濾紙條,一端浸入展開劑中,密封缸頂?shù)纳w,使系統(tǒng)平衡或

  按正文規(guī)定操作。

  將點(diǎn)好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中,浸入展開劑的深度為距薄層板底邊0.5

  ~1.0cm(切勿將樣點(diǎn)浸入展開劑中),密封缸蓋,待展開至規(guī)定距離(一般為10~15cm),

  取出薄層板,晾干,按各品種項下的規(guī)定檢測。

  (4) 如需用薄層掃描儀對色譜斑點(diǎn)作掃描檢出,或直接在薄層上對色譜斑點(diǎn)作掃描

  定量,則可用薄層掃描法。

  薄層掃描的方法,除另有規(guī)定外,可根據(jù)各種薄層掃描儀的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及使用說明,

  結(jié)合具體情況,選擇吸收法或熒光法,用雙波長或單波長掃描。由于影響薄層掃描結(jié)果

  的因素很多,故應(yīng)在保證供試品的斑點(diǎn)在一定濃度范圍內(nèi)呈線性的情況下,將供試品與

  對照品在同一塊薄層上展開后掃描,進(jìn)行比較并計算定量,以減少誤差。各種供試品,

  只有得到分離度和重現(xiàn)性好的薄層色譜,才能獲得滿意的結(jié)果。

  掃描儀

  用表面涂有吸附劑的石英棒(直徑0、9mm;長200mm)代替薄層板,點(diǎn)樣于棒一端,按一般方法展開,以氫焰檢測器為檢測單元,棒放于儀器內(nèi),點(diǎn)火,以一定速度掃描。

  后測定法

  薄層經(jīng)展開后用刮刀或捕集器將斑點(diǎn)的吸附劑捕集后,再用適當(dāng)有機(jī)溶劑洗脫,然后用可見、紫外分光光度法、熒光分光光度法測定含量。

  但樣品斑點(diǎn)不能噴顯色劑,以免影響測定,斑點(diǎn)位置的確定方法。

  樣品在紫外線下發(fā)射熒光的,可在紫外燈下觀察斑點(diǎn)并用針劃去斑點(diǎn)位置。

  用碘蒸汽顯色,在組分處理出棕色斑點(diǎn)(碘吸附后會揮發(fā))。

  用標(biāo)準(zhǔn)物對照,將標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)于邊上一測顯色時,蓋住樣品,定出斑點(diǎn)位置。


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